C166 小鼠血管内皮细胞（种属鉴定）

细胞描述：      

  C166细胞是从 12 天大的小鼠胚胎卵黄囊中分离出来的内皮细胞系，可用于心血管疾病和干细胞研究。该细胞系应可用于研究内皮细胞分化和确定器官特异性内皮细胞异质性建立的机制。该细胞系可以支持多能造血干细胞的稳定增殖，从而产生足够数量的细胞用于研究其后续发育和分化的机制,C166 细胞系是由 F1 胚胎细胞建立的，F1 胚胎是通过将雌性 NMRI/GSF 小鼠与转基因人类 fes (fps/fes) 原癌基因的雄性 CD-1 小鼠交配获得的。这些小鼠表达人类 fes (fps/fes) 原癌基因的激活等位基因的多个拷贝，并表现出血管丰富性，进展为多灶性血管瘤。C166 细胞表现出正常的内皮特征，例如放置在基质胶上时重排成管状结构，并在汇合时保留鹅卵石形态。细胞组成型表达由抗体 MECA-99 识别的血管寻址蛋白。该细胞系表达高水平的由 fes (fps/fes) 原癌基因编码的细胞质蛋白酪氨酸激酶。

细胞特性：

1） 来源： 小鼠，胚胎

2） 形态：内皮细胞样 ，贴壁生长

3） 规格：1×106cells

4） 培养条件：DMEM+10%FBS+1%P/S (推荐货号AW-MC001)

                       空气，95%；二氧化碳，5%

                       37℃

细胞接收后的处理：

1） 收到细胞后，活细胞首先观察培养瓶是否完好，培养液是否漏液，培养基是否浑浊；冻存细胞是否干冰已挥发完，冻存管盖是否脱落，破碎，若有这类情况，请务必拍照记录，并于收货24h内与我们联系。

2） 细胞处理：

复苏的细胞：如果是T-25培养瓶活细胞，收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理，然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。

备注：运输用的培养基不宜再次用来培养细胞，请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞。  

冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮存储或者短暂（24h）放置-80度冰箱保存，或者直接进行细胞复苏。

细胞复苏、传代及冻存流程参考：

1、 细胞复苏

1） 配制完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）；

2） 细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3） 吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）；

4） 24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。

2、 细胞传代

1） 待细胞生长到80%-90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆；

2） 加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min；

3） 收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。

3、细胞冻存

1） 按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数；

2） 用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*106个/ml。

3） 放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。