细胞描述： GH3细胞系是由Tashjian AH等在1965年7月从一只7月龄的雌性Wistar-Furth大鼠的垂体肿瘤中分离建立的。GH3细胞系不是直接来源于GH1细胞系的克隆，而是从原代培养的GH1细胞在大鼠身上传代两次形成的肿瘤中建立的。上皮样的GH3细胞比GH1分泌更高水平的生长激素，也可产生
细胞描述：
这株细胞于1988年七月建株，组织提供者是一位非吸烟人士。
细胞特性：
1） 来源：器官：肺 疾病：腺癌；非小细胞肺
2） 形态：纤维细胞样，贴壁生长
3） 规格：1×106cells
4） 培养条件：RPMI-1640培养基+10%优质胎牛血清+1%P/S (推荐货号AW-MC002)
空气，95%；二氧化碳，5%
37℃
细胞接收后的处理：
1） 收到细胞后，活细胞首先观察培养瓶是否完好，培养液是否漏液，培养基是否浑浊；冻存细胞是否干冰已挥发完，冻存管盖是否脱落，破碎，若有这类情况，请务必拍照记录，并于收货24h内与我们联系。
2） 细胞处理：
复苏的细胞：如果是T-25培养瓶活细胞，收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理，然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。
备注：运输用的培养基不宜再次用来培养细胞，请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞。
冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮存储或者短暂（24h）放置-80度冰箱保存，或者直接进行细胞复苏。
细胞复苏、传代及冻存流程参考：
1、 细胞复苏
1） 配制完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）；
2） 细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3） 吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）；
4） 24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。
2、 细胞传代
1） 待细胞生长到80%-90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆；
2） 加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min；
3） 收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。
3、细胞冻存
1） 按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数；
2） 用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*106个/ml。
3） 放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。
参考文献 (3)
GENE IF:3.5
Objective Lung adenocarcinoma (LUAD) is the most common subtype of lung cancer, with high morbidity and mortality. N6-methyladenosine (m6A) is an important regulator of LUAD progression. Here, we investigated the potential biological functions of ALKBH5 (a m6A demethylated enzyme) and cell division cycle associated protein 4 (CDCA4) in the progression of LUAD. Methods The expressions of CDCA4, METTL3, ALKBH5, FTO, YTHDC2 and YTHDC1 mRNA and proteins in LUAD and adjacent tissues, as well as NCI-H1299 and NCI-H157 cells were detected by RT-qPCR and western blot. Meanwhile, the role of ALKBH5 and CDCA4 in macrophage polarization was explored through tumor formation in Lewis lung carcinoma (LLC) mice and the co-culture system of NCI-H1299 and NCI-H157/THP-1 cells. Cell characterization was further analyzed. The expression of Ki-67 in tumor tissue was tested by immunohistochemistry. The scale of M1 and M2 macrophages was determined by flow cytometry. Results CDCA4 was significantly overexpressed in NCI-H1299 and NCI-H157 cell lines compared with BEAS-2B cells. The fold enrichment of CDCA4 m6A level in the overexpression (oe)-METTL3 or short hairpin (sh)-ALKBH5 cells was enhanced. Overexpression of CDCA4 promoted the cell viability, proliferation and migration, and inhibited apoptosis, which was reversed by sh-ALKBH5 intervention. Overexpression of YTHDC2 (not YTHDC1) inhibited the effect of CDCA4 on sh-ALKBH5 cells. sh-CDCA4 inhibited tumor growth and weight of LLC cells in mice, and promoted M1/M2 ratio in LLC mice and NCI-H1299/THP-1 and NCI-H157/THP-1 co-culture systems. Oe-CDCA4 promoted the volume and weight of tumor and inhibited the M1/M2 ratio of tumor tissue in LLC mice, but was reversed by sh-ALKBH5 intervention. Conclusion m6A demethylase ALKBH5 promotes the development of LUAD through CDCA4 regulation of malignant characterization and M1/M2 macrophage polarization.
IUBMB LIFE IF:3.2
Cell division cycle-associated protein 4 (CDCA4) has the potential to indicate lung adenocarcinoma (LUAD) development, but its regulatory role in mitophagy remains unclear. This study aimed to elucidate the mitophagy regulation and therapeutic implications of CDCA4 in LUAD. CDCA4 expression was significantly elevated in LUAD clinical specimens versus paracancerous tissues and inversely correlated with mitophagy activity. Lentiviral vectors were employed to manipulate established LUAD cells, followed by treatment with chloroquine (CQ; lysosomal inhibitor) and rapamycin (autophagy inducer) in CDCA4-silenced cells. CDCA4 knockdown elevated total and mitochondrial superoxide levels, disrupted mitochondrial membrane potential, activated the PINK1/Parkin pathway, enhanced LC3-II conversion, and degraded mitochondrial membrane proteins, collectively promoting mitophagy. Silencing CDCA4 suppressed malignant phenotypes (proliferation/migration), effects reversed by CQ but exacerbated by rapamycin. Mechanistically, CDCA4 interacted with SERTAD1 and E2F1 and stabilized these proteins. The promotion of mitophagy by CDCA4 silencing was impaired by the overexpression of SERTAD1 and E2F1. LUAD cells silencing CDCA4 were injected into immunodeficient mice for in vivo verification. CDCA4-silenced xenografts exhibited suppressed tumor growth, increased apoptosis, and elevated mitophagy-related markers. This study identifies the CDCA4/SERTAD1/E2F1 complex as a pivotal mitophagy-inhibitory hub in LUAD, proposing this axis as a novel predictive and therapeutic target.
BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-GENERAL SUBJECTS IF:2.8
Background Ferroptosis, a type of autophagy-dependent cell death, has been implicated in the pathogenesis of lung adenocarcinoma (LUAD). This study aimed to investigate the involvement of coatomer protein complex I subunit zeta 1 (COPZ1) in ferroptosis and ferritinophagy in LUAD. Methods Publicly available human LUAD sample data were obtained from the TCGA database to analyze the association of COPZ1 expression with LUAD grade and patient survival. Clinical samples of LUAD and para-carcinoma tissues were collected. COPZ1-deficient LUAD cell model and xenograft model were established. These models were analyzed to evaluate tumor growth, lipid peroxidation levels, mitochondrial structure, autophagy activation, and iron metabolism. Results High expression of COPZ1 was indicative of malignancy and poor overall survival. Clinical LUAD tissues showed increased COPZ1 expression and decreased nuclear receptor coactivator 4 (NCOA4) expression. COPZ1 knockdown inhibited xenograft tumor growth and induced apoptosis. COPZ1 knockdown elevated the levels of ROS, Fe 2+ and lipid peroxidation. COPZ1 knockdown also caused mitochondrial shrinkage. Liproxstatin-1, deferoxamine, and z-VAD-FMK reversed the effects of COPZ1 knockdown on LUAD cell proliferation and ferroptosis. Furthermore, COPZ1 was directly bound to NCOA4. COPZ1 knockdown restricted FTH1 expression and promoted NCOA4 and LC3 expression. NCOA4 knockdown reversed the regulation of iron metabolism, lipid peroxidation, and mitochondrial structure induced by COPZ1 knockdown. COPZ1 knockdown induced the translocation of ferritin to lysosomes for degradation, whereas NCOA4 knockdown disrupted this process. Conclusion This study provides novel evidence that COPZ1 regulates NCOA4-mediated ferritinophagy and ferroptosis. These findings provide new insights into the pathogenesis and potential treatment of LUAD.
细胞描述： 胶质细胞株C6是由Benda等用N-nitrosomethylurea诱导的大鼠胶质瘤克隆，并经过一系列的体外培养和动物传代交替后建成的。当细胞从低密度生长到满瓶时，S-100产量增加10倍。 细胞特性： 1）来源：大鼠，胶质瘤 2）形态：成纤维细胞样，贴壁生长 3）规格：1×10 6 cells
细胞描述： 克隆Neuro-2A是由R·J·Klebe和F·H·Ruddle经A株白鼠的自生肿瘤建立。该细胞产生大量微管蛋白，此蛋白在神经细胞中起应答轴浆流动的收缩系统作用。 细胞特性： 1）来源：脑神经母细胞瘤 2）形态：阿米巴样干细胞，贴壁生长 3）规格：1×10 6 cells 4）培养条件： MEM+
细胞描述： 此AML12（α小鼠肝脏12）细胞系由来自针对人TGFα的转基因小鼠（CD1菌株，品系MT42）的肝细胞建立。通过电子显微镜观察，这些细胞表现出典型的肝细胞特征，例如过氧化物酶体和胆小管样结构。AML12细胞保留表达血清（白蛋白，α1抗胰蛋白酶和转铁蛋白）和间隙连
细胞描述： OVCAR-3细胞由T·C·Hamilton在1982年建系。取于患进行性卵巢腺癌病人的恶性腹水。NIH-OVCAR-3是研究卵巢癌药物抗性的一个合适的模型系统且由于存在激素受体，这对于激素治疗的评估或许是有用的。 细胞特性： 1）来源： 卵巢 2）形态：上皮细胞样，贴壁生长 3）规格
细胞描述： 该细胞是从一名13岁的白人女性的骨肉瘤组织中分离建立的，表现为扁平形态、低饱和密度、软琼脂中的低克隆形成率和对化合物及病毒感染的敏感性。 细胞特性： 1）来源：骨 2）形态：上皮细胞样，贴壁生长 3）规格：1×10 6 cells 4）培养条件： MEM+10%FBS+1%NEAA+1
细胞描述： 该细胞系于1982年建立，从一位56岁白种男性的病变舌中间部分取得，该细胞具高密度颗粒状胞浆 。 细胞特性： 1）来源：舌 2）形态：上皮细胞样，贴壁生长 3）规格：1×10 6 cells 4）培养条件： DMEM+10%FBS+1%P/S 空气，95%；二氧化碳，5% 37℃ 细胞接收后的处理： 1）收
细胞描述： HEK-293T细胞是293T（293tsA1609neo）细胞系（ATCC CRL-11268）的衍生物。细胞持续表达SV40抗原，该细胞常用于转染实验，转染效率较高。（转染一般以50%密度铺板，待细胞刚刚贴到皿壁上后（一般8-10小时），即可进行转染操作） 。 细胞特性： 1）来源： 人胚胎肾脏 2）形
这株细胞于1988年七月建株，组织提供者是一位非吸烟人士。
该人胰腺癌细胞PANC-1来源于一名56岁白人男性。1 U/ml 左旋天冬酰胺酶(L-asparaginase)可抑制其生长。此细胞可以在琼脂糖上生长。其倍增时间为52小时，G6PD活性处于低泳动性的B型。染色体研究表明模式数目为63，包括3个独特标记的染色体和1个小环状染色体。 以下二点证明它的恶性：(1)在软琼脂上和单层成纤维细胞上的快速生长，(2)注入无胸腺裸鼠后形成日益增长的成长型未分化癌。
细胞描述： GH3细胞系是由Tashjian AH等在1965年7月从一只7月龄的雌性Wistar-Furth大鼠的垂体肿瘤中分离建立的。GH3细胞系不是直接来源于GH1细胞系的克隆，而是从原代培养的GH1细胞在大鼠身上传代两次形成的肿瘤中建立的。上皮样的GH3细胞比GH1分泌更高水平的生长激素，也可产生
细胞描述： 胶质细胞株C6是由Benda等用N-nitrosomethylurea诱导的大鼠胶质瘤克隆，并经过一系列的体外培养和动物传代交替后建成的。当细胞从低密度生长到满瓶时，S-100产量增加10倍。 细胞特性： 1）来源：大鼠，胶质瘤 2）形态：成纤维细胞样，贴壁生长 3）规格：1×10 6 cells
细胞描述： 克隆Neuro-2A是由R·J·Klebe和F·H·Ruddle经A株白鼠的自生肿瘤建立。该细胞产生大量微管蛋白，此蛋白在神经细胞中起应答轴浆流动的收缩系统作用。 细胞特性： 1）来源：脑神经母细胞瘤 2）形态：阿米巴样干细胞，贴壁生长 3）规格：1×10 6 cells 4）培养条件： MEM+
细胞描述： 此AML12（α小鼠肝脏12）细胞系由来自针对人TGFα的转基因小鼠（CD1菌株，品系MT42）的肝细胞建立。通过电子显微镜观察，这些细胞表现出典型的肝细胞特征，例如过氧化物酶体和胆小管样结构。AML12细胞保留表达血清（白蛋白，α1抗胰蛋白酶和转铁蛋白）和间隙连
细胞描述： OVCAR-3细胞由T·C·Hamilton在1982年建系。取于患进行性卵巢腺癌病人的恶性腹水。NIH-OVCAR-3是研究卵巢癌药物抗性的一个合适的模型系统且由于存在激素受体，这对于激素治疗的评估或许是有用的。 细胞特性： 1）来源： 卵巢 2）形态：上皮细胞样，贴壁生长 3）规格
细胞描述： 该细胞是从一名13岁的白人女性的骨肉瘤组织中分离建立的，表现为扁平形态、低饱和密度、软琼脂中的低克隆形成率和对化合物及病毒感染的敏感性。 细胞特性： 1）来源：骨 2）形态：上皮细胞样，贴壁生长 3）规格：1×10 6 cells 4）培养条件： MEM+10%FBS+1%NEAA+1
细胞描述： 该细胞系于1982年建立，从一位56岁白种男性的病变舌中间部分取得，该细胞具高密度颗粒状胞浆 。 细胞特性： 1）来源：舌 2）形态：上皮细胞样，贴壁生长 3）规格：1×10 6 cells 4）培养条件： DMEM+10%FBS+1%P/S 空气，95%；二氧化碳，5% 37℃ 细胞接收后的处理： 1）收
细胞描述： HEK-293T细胞是293T（293tsA1609neo）细胞系（ATCC CRL-11268）的衍生物。细胞持续表达SV40抗原，该细胞常用于转染实验，转染效率较高。（转染一般以50%密度铺板，待细胞刚刚贴到皿壁上后（一般8-10小时），即可进行转染操作） 。 细胞特性： 1）来源： 人胚胎肾脏 2）形
这株细胞于1988年七月建株，组织提供者是一位非吸烟人士。
该人胰腺癌细胞PANC-1来源于一名56岁白人男性。1 U/ml 左旋天冬酰胺酶(L-asparaginase)可抑制其生长。此细胞可以在琼脂糖上生长。其倍增时间为52小时，G6PD活性处于低泳动性的B型。染色体研究表明模式数目为63，包括3个独特标记的染色体和1个小环状染色体。 以下二点证明它的恶性：(1)在软琼脂上和单层成纤维细胞上的快速生长，(2)注入无胸腺裸鼠后形成日益增长的成长型未分化癌。
